来源：海产养殖动物疾病防控技术国家地方联合工程实验室作者：黄冠军鲤科疱疹病毒III型(Cyprinidherpesvirus3, CyHV-3)是疱疹病毒科中具有强致性和强传染性的成员，对该病毒的检测方法主要是酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫组化法、聚合酶链式反应法(PCR法)和环介导恒温扩增法(LAMP)，这些方法由于在操作简便性、检测灵敏度、检测准确性和现场可操作性等方面存在的问题而使用受限。近期，美国俄勒冈州立大学的科学家公布了一种检测鲤科疱疹病毒III型的方法—重组酶聚合酶扩增法(recombinasepolymerase amplification, RPA)，并结合核酸试纸检测，大大降低了操作的复杂性，提高了检测的灵敏度和准确性。该方法只需对样品进行简单的预处理，在37℃条件下完成病毒DNA的扩增，并使用核酸检测试纸对产物进行检测，全部过程只需30min，可检出10个拷贝数的病毒基因组DNA，阳性检出率高于荧光定量PCR，真正实现了塘边检测。重组酶聚合酶扩增技术是Piepenburg等于2006年首先提出的一种新型的核酸恒温扩增技术，主要依赖于重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶这三种酶，最适反应温度在37-42℃之间，无需复杂的样品前处理和核酸变性，可扩增DNA和RNA，一般可在10分钟之内获得可检出水平的扩增产物，同时可实现数据的实时读取和多个模板的同步检测，被认为是可真正替代PCR的技术。由于该方法是在恒温下完成核酸的扩增，结合核酸检测试纸，可在养殖现场推广使用，具有广阔的应用前景。 来源：海产养殖动物疾病防控技术国家地方联合工程实验室作者：黄冠军
来源：海产养殖动物疾病防控技术国家地方联合工程实验室作者：黄冠军
