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苗种培育:鱼类精液保存技术

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-07-31 21:21:49    作者:将军    浏览次数:476
导读

精子活动所须要的能量来自于原生质中的养分物资,因为精子的原生质少少,能量有限,故精子排进水中被激活后的寿命很短。精子的能量还用于调节细胞表里渗入压均衡。鱼类***的保留就是

精子活动所须要的能量来自于原生质中的养分物资,因为精子的原生质少少,能量有限,故精子排进水中被激活后的寿命很短。精子的能量还用于调节细胞表里渗入压均衡。鱼类***的保留就是应用下降精子代谢率的方式削减能量的耗费,从而到达延伸精子寿命的目标。

  跟着鱼类养殖业的敏捷成长以及杂交育种、精良品种的选育与提纯复壮等工作的开展,鱼类***保留技巧的利用越来越普遍。鱼类***的保留方式有常温保留、冷躲保留和冷冻保留。常温保留和冷躲保留用于短期保留***,而冷冻或超低温冷冻则用于持久保留***。本文就鱼类***保留技巧做一简略论述。

  一、常温保留

  在常温前提下,将鱼类精子处于等渗情况中,削减精子用来调节渗入压均衡的能量耗费而延伸精子的寿命。在人工授精操纵进程中,用心理盐水取代淡水,可进步受精率。

  二、冷躲保留

  冷躲保留是应用通俗冰箱的冷躲室(0~4℃)保留鱼类***,这种方式可保留***达数天至数十天,假如在***中参加适合的稀释液,同时将冷躲室的题目调低,保留时光更长。冷躲保留时精子有微弱的代谢须要耗费氧气,是以在保留时应坚持必定的空气或氧气。***冷躲保留时,抗生素是必不成少的。常用的抗生素有:青霉素,5000IU/ml***;硫酸新霉素,1mg/ml***;青霉素1000IU 链霉素5000IU/ml***;金霉素0.6mg/ml***。硫酸新霉素及青霉素 链霉素后果较好。此法简洁、本钱低廉,合适在出产上推广利用。

  三、冷冻保留

  常温保留和冷躲保留用于短期保留***,而冷冻或超低温冷冻则可以持久保留***。常用的制冷剂有干冰和液氮等。超低温下,精子的代谢停止,精子处于假逝世状况,性命以静止情势保留。精子冷冻保留的基础技巧路线为:***的采集→参加稀释液和抗冻剂→降温均衡→液氮中持久保留→解冻苏醒→活气检测。

  1.稀释液、抗冻剂
  稀释液的配制是鱼类***冷冻保留中要害的一步。因为鱼的种的特异性,分歧鱼类***冷冻保留对稀释液的请求分歧,今朝还没有同一的尺度。一般以为稀释液的成分在适合的范畴内越简略越好。已用过的鱼类***保留稀释液成份重要有:盐类(如NaHCO3、NaCl、KCl等)、糖类(如葡萄糖、果糖、蔗糖等)、脂类(重要是磷脂)和卵白质(如卵黄、奶、小牛血清等)以及其他添加剂(如维生素、抗生素等)。有研讨以为,海水鱼类用由葡萄糖和柠檬酸钠构成的稀释液就能获得杰出的冷冻后果。淡水鱼类稀释液则应以氯化钠和氯化钾为主,参加少量氯化钙、氯化镁、碳酸氢钠和葡萄糖。常用的抗冻剂有甘油、二甲亚砜、乙二醇、乙酰胺和丙二醇等。甘油是海水鱼类***冷冻保留的有用抗冻剂,而二甲亚砜普遍利用于淡水鱼类***的保留。

  2.冷冻方式
  冷冻方式今朝重要应用4种方式:颗粒冷冻法:麦管冷冻法;玻璃安瓿瓶冷冻法;塑料离心管冷冻法。颗粒冷冻法因为冷冻量小、操纵较麻烦等原因,今朝较少采取。玻璃安瓿瓶法固然体积较年夜,后果也不错,但瓶口封口操纵比拟麻烦,加之在解冻时,安瓿瓶轻易爆裂,故其应用也受到限制。而麦管冷冻法和塑料离心管冷冻法,因为具有冷冻量年夜、操纵简洁、平安等特色,普遍利用于鱼类***冷冻保留和精子库树立。

  3.降温均衡
  降温均衡是否须要应鱼类的种类而异。对于某一种具体的鱼类精子而言,存在着其特异性的最佳冷却速度,过快或过慢的冷却速度均会导致细胞毁伤,下降精子的存活率。今朝常采取-10℃/min的降落速度,在达到某一低温后(-76℃,-150℃等)或直接浸进液氮中,或均衡一段时光后再浸进液氮中。

  4.解冻苏醒
  解冻苏醒是精子升温消融苏醒的进程。解冻的要害身分是解冻液息争冻速度。淡水鱼类冻精解冻液用体积分数0.65%~0.7%氯化钠溶液,海水鱼类冻精直接用海水即可。解冻方式有室温天然解冻和快速解冻,比拟常用的是在30℃~40℃的水浴中快速解冻。一般而言,假如冷却进程的速度较快,那么响应的复温速度也要快。

  5.活气检测
  解冻后当即在显微镜下检讨精子活气:即视野中作直线进步活动的精子的百分比。在原地颤抖或摆动或作微弱曲线活动的精子无受精才能。
  跟着鱼类养殖业的敏捷成长以及杂交育种、精良品种的选育与提纯复壮等工作的开展,鱼类***保留技巧的利用越来越普遍。***保留的鱼类种类由较为单一的品种扩展到各常见的海淡水鱼类以及一些濒危、爱护水活泼物,保留方式也由较为简略的常温保留、冷躲保留向更为庞杂的冷冻保留逐渐深刻。鱼类精子保留技巧已经日趋完美,己分辨树立了鲤科鱼类、鲑科鱼类、斑鱼、罗非鱼、鲷科鱼类及鲻鱼等淡、海水鱼类精子冷冻保留技巧,并树立了淡水鲤科鱼类和一些海水经济鱼类冷冻精子库。但还存在很多有待解决的题目,如冷冻前提的优化(稀释液的配方、降温速度、冷冻保留方式息争冻温度等),冷冻毁伤造成精子逝世亡或活气下降,抗冻剂的洗脱等。
 
(文/将军)
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