技巧概述：
我国养殖虾类产量在2008年到达198万吨，占世界总产量的40%以上，对虾病毒病爆发给我国对虾养殖业造成丧失在50亿元以上;开展对虾苗种病毒检测是避免病毒病年夜范围爆发风行削减丧失的主要道路。
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技巧是2000年由Notomi 等发现的一种全新的等温扩增技巧。经由过程开展LAMP技巧检测对虾病毒的研讨，中国水产科学研讨院黄海水产研讨所胜利开辟出适用性强、特异性高的对虾白斑综合征病毒(WSSV)、桃拉综合征病毒(TSV)、沾染性皮下及造血组织坏逝世病毒(IHHNV)、肝胰腺渺小病毒(HPV)、斑节对虾杆状病毒(MBV)、黄头病毒(YHV)、沾染性肌肉坏逝世病毒(IMNV)、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)、凡纳滨对虾诺达病毒(PvNV)、对虾杆状病毒(BP)等十多种虾类病毒的系列核酸等温扩增检测技巧;同时，经由过程研发核酸快速制备、染料固定化等配套技巧，今朝已经树立了上述病毒的现场快速高敏锐检测技巧并研产生产了相干检测试剂盒。
此技巧具有如下长处：
(1)敏锐度高，对病毒的检测可低至10个拷贝，其敏锐度比通俗PCR方式高100倍以上;
(2)特异性强，所用的检测引物均是根据病毒守旧基因中6个分歧区域设计，特异性跨越惯例PCR;
(3)检测时光短，从核酸制备到检测完成只需1个小时;
(4)仪器请求宽松，不须要庞杂的仪器装备，只要一个水浴锅或金属浴，甚至一热壶开水和一个温度计就能完成检测反映。
(5)操纵简略、成果显明。全部检测进程不涉及庞杂仪器或装备，稍具分子生物学基本的职员即可完成操纵;检测成果清楚显明，直接用眼睛察看就可以判定。
(6)对人和情况平安。检测进程中不应用有毒试剂，对人和情况都很是平安。
(7)低本钱。 LAMP检测总本钱年夜年夜低于现有最便宜的PCR检测方式。
今朝，该项技巧已申请国度发现专利20项，获得授权14项。
增产增效情形：今朝，应用上述检测技巧已经完成了对来自辽宁、天津、河北、山东、江苏、浙江、福建、广东、广西等省市的800多份对虾样品的检测。检测成果显示，核酸等温扩增检测方式比PCR检测方式具有更高的敏锐度和靠得住性。而且，该检测技巧不涉及有毒的试剂，对操纵职员健康和情况维护都很是友爱;与之前对虾病毒检测技巧比拟，该项技巧除对仪器装备无特别请求外，还能使检测本钱下降50%以上。
技巧要点：
1.取对虾个别(仔虾、幼体和幼虾)或对虾鳃丝或附肢(成虾)样品约磨碎至浆状;
2.用牙签蘸取浆状的样品分辨采样用膜片充足润湿;
3.用吸管汲取A液，滴于的采样用膜片上;
4.取新牙签将上述采样用膜片漂洗3~4 分钟;
5.采样用膜片、阳性及阴性对比膜片于95℃保温4 分钟，敏捷置于冷水中2分钟;
6.将上述膜片转进反映液中57~60 ºC保温50分钟;
7.将反映液于90~95 ºC保温2分钟;
8.察看反映液色彩，假如显示绿色则表现该样品的病毒检测成果为阳性，假如显示橙黄色则表现该样品的病毒检测成果为阴性。
合适区域：适于在现场、水产养殖企业、相干各级试验室应用，尤其可以或许知足技巧气力相对单薄的对虾育苗、养殖单元开展示场检测的须要。
留意事项：
1.因该检测技巧的敏锐度很是高，所以检测进程应严厉依照操纵指南进行，反映停止后不克不及打开扩增检测管，以防反映产品溅出污染后续检测样品导致假阳性的呈现。
2.玄色布景更利于试验成果的察看。扩增反映停止后，可应用试剂盒阐明书中供给的玄色布景进行察看。
技巧依托单元：中国水产科学研讨院黄海水产研讨所
